利用一束光來(lái)治療疾??？通過(guò)光照實(shí)現(xiàn)降血糖？

2021年10月4日，生物技術(shù)領(lǐng)域頂級(jí)期刊《Nature Biotechnology》在線(xiàn)發(fā)表了來(lái)自華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院、上海市調(diào)控生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、華東師范大學(xué)醫(yī)學(xué)合成生物學(xué)研究中心葉海峰研究團(tuán)隊(duì)的成果“A small and highly sensitive red/far-red light-mediated optogenetic switch for multiple applications in mammals”。

REDMAP系統(tǒng)原理

該研究開(kāi)發(fā)了一個(gè)模塊小、靈敏度高、可逆性良好的光遺傳學(xué)工具，命名為REDMAP。研究人員將裝載REDMAP系統(tǒng)的工程化細(xì)胞移植至小鼠、大鼠和兔的皮下后，可以通過(guò)光來(lái)精準(zhǔn)控制小鼠和大鼠體內(nèi)胰島素的表達(dá)，成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)糖尿病小鼠和大鼠血糖穩(wěn)態(tài)的控制。無(wú)需每天定時(shí)服用藥物或注射胰島素，只需要每天光照幾分鐘即可達(dá)到顯著降血糖的效果。

據(jù)葉海峰團(tuán)隊(duì)介紹，課題組將目光放在了來(lái)自植物擬南芥的光敏蛋白PhyA（phytochrome A）上，在紅光照射下，該蛋白能和其伴侶蛋白FHY1(far-red elongated hypocotyl 1)形成二聚體，并在遠(yuǎn)紅光照射下解離。根據(jù)這一特點(diǎn)，研究人員構(gòu)建了基于PhyA-FHY1的轉(zhuǎn)錄激活系統(tǒng)。研究人員將PhyA與GAL4的DNA結(jié)合域融合表達(dá)，將FHY1和轉(zhuǎn)錄激活因子VP64融合表達(dá)。紅光刺激下，PhyA-GAL4和FHY1-VP64結(jié)合形成復(fù)合體并招募RNA聚合酶，從而啟動(dòng)下游基因的表達(dá)。但起初，使用完整的PhyA并不能激活下游基因的表達(dá)。隨后，研究人員對(duì)其進(jìn)行了工程改造，通過(guò)優(yōu)化激活子和伴侶蛋白，最終得到了一個(gè)模塊小且高度靈敏地響應(yīng)紅光的光遺傳學(xué)工具，并將其命名為REDMAP。

REDMAP介導(dǎo)的小鼠體內(nèi)長(zhǎng)期基因控制

利用光來(lái)控制細(xì)胞信號(hào)通路可以為基礎(chǔ)研究提供便捷可控的研究方法。因此，葉海峰課題組將ΔPhyA定位到細(xì)胞膜上，將FHY1和SOS蛋白的激活域SOScat進(jìn)行融合表達(dá)，通過(guò)紅光照射來(lái)控制SOScat的細(xì)胞定位，從而實(shí)現(xiàn)了Ras/MAPK信號(hào)通路的激活和去激活，成功構(gòu)建了REDMAPSOS-Ras工具。此外，研究人員還構(gòu)建了REDMAPCas工具,將REDMAP系統(tǒng)與基因編輯工具CRISPR-dCas9結(jié)合在一起，實(shí)現(xiàn)了對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、小鼠肝臟及肌肉內(nèi)源基因轉(zhuǎn)錄的高效調(diào)控。

接著，研究人員探究了REDMAP系統(tǒng)在基因治療領(lǐng)域的能力。由于截短的ΔPhyA蛋白具有較小的尺寸，可以利用腺相關(guān)病毒包裝。因此，研究人員將REDMAP包裝至腺相關(guān)病毒（AAV2/8）中并將其注射至小鼠體內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了長(zhǎng)達(dá)三個(gè)月以上的光控基因表達(dá)。

治療蛋白的精準(zhǔn)控制對(duì)疾病的治療具有重要意義。研究人員將裝載REDMAP系統(tǒng)的工程化細(xì)胞移植至小鼠、大鼠和兔的皮下，探究其光響應(yīng)能力。結(jié)果顯示，短時(shí)間的光照（1-5分鐘）即可誘導(dǎo)報(bào)告基因的高效表達(dá)。接著，研究人員通過(guò)光來(lái)精準(zhǔn)的控制小鼠和大鼠體內(nèi)胰島素的表達(dá)，成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)糖尿病小鼠和大鼠血糖穩(wěn)態(tài)的控制。無(wú)需每天定時(shí)服用藥物或注射胰島素，只需要每天光照幾分鐘即可達(dá)到顯著降血糖的效果，這充分表明了REDMAP系統(tǒng)在精準(zhǔn)可控的細(xì)胞治療領(lǐng)域具有極高的應(yīng)用潛能。

總之，該研究開(kāi)發(fā)了一個(gè)模塊小、靈敏度高、可逆性良好的光遺傳學(xué)工具，為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究，尤其是精準(zhǔn)可控的基因治療和細(xì)胞治療領(lǐng)域提供了強(qiáng)有力的新型控制系統(tǒng)。

據(jù)悉，2019級(jí)博士生周陽(yáng)和2020級(jí)博士生孔德強(qiáng)為共同第一作者，葉海峰研究員為論文的通訊作者。該研究受到了國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“合成生物學(xué)”重點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)、國(guó)家自然科學(xué)基金、上海市科委合成生物學(xué)重大項(xiàng)目的資助。